ENZO熱銷產品——FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit組蛋白去乙酰化酶熒光活性檢測試劑盒
目前，組蛋白去乙酰化酶抑制劑已經顯示出其作為抗腫瘤藥物的前景，這也自然激發了研究者們對于篩選HDAC（Histone deacetylase，組蛋白去乙酰化酶）抑制化合物的興趣。Enzo的FLUOR DE LYS®HDAC熒光活性檢測試劑盒（貨號：BML-AK500-0001）是一種靈敏、便捷的組蛋白去乙酰化酶檢測試劑盒，可替代使用傳統的放射性標記的乙酰化組蛋白和肽/HPLC法檢測組蛋白去乙酰化酶的方案。
FLUOR DE LYS®去乙酰化酶檢測平臺是Enzo的升級酶活性檢測系列產品的基礎，其中的產品就包括用于篩選HDAC（組蛋白去乙酰化酶）活性調節劑和Sirtuin（長壽蛋白，一種去乙酰化酶）活性調節劑的試劑盒。Enzo還可提供基于熒光共振能量轉移（FRET）的試劑盒，用以檢測基質金屬蛋白酶（MMPs）和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）的活性，以及提供基于磷酸特異性抗體的激酶檢測試劑盒。
這些檢測證明了Enzo在組裝小肽、合成活性重組蛋白、熒光標記和檢測技術，以及抗體開發等多方面協同的能力，也保障了Enzo能夠生產出功能強大且重復性好的檢測試劑盒。
Enzo的酶活性檢測試劑盒均具有以下特點：
高品質：高活性、高純度的重組酶，可呈現高質量的底物結合效果
靈活性：批量酶和底物可用于篩選后研究
強創新：多種readout 格式的專-利底物/顯影劑化學物質
作用機制：
FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit基于Enzo特-有的 FLUOR DE LYS®（熒光法組蛋白去乙酰化酶-賴氨酸）底物和顯影劑組合，只需2步簡單的混合步驟，即可在同一個96 孔板上進行檢測。首先，將含有乙酰化賴氨酸側鏈的FLUOR DE LYS®底物與含有HDAC活性的樣品（HeLa核或其他提取物、純化酶、珠結合免疫復合物等）一起孵育。底物的去乙酰化會使底物增敏，所以在第二步中，將其與FLUOR DE LYS®顯影劑混合后會產生熒光團。
該檢測方法目前已經成功用于所有已知的I類HDAC——HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8（見產品數據表）和II 類HDAC 4-7、9和10，以及人類Sir2同源物和SIRT1（見產品數據表）的制備。Enzo Life Sciences的研究表明，FLUOR DE LYS®底物具有細胞滲透性，并可在原位被細胞HDAC去乙酰化。脫乙酰化的底物在細胞內積聚后，可通過向細胞裂解液中加入FLUOR DE LYS®顯影劑進行定量測定。
Figure 1. HDAC熒光活性檢測的反應方案。底物去乙酰化使其對顯影劑敏感，從而產生熒光團（symbol）。熒光團可被360 nm的光激發，并發射出460 nm的光，發射光在熒光平板閱讀器上可被檢測到。
產品特點：
使用提供的核提取物，有助于檢測裂解物、免疫沉淀物以及篩選抑制劑；
含有HeLa核提取物，作為HDAC 1和2的豐富來源，可用作陽性對照，也可用作篩選HDAC活性的來源；
與I & IIb類HDAC和Sirtuin兼容（添加NAD+）；
無放射性，沒有提取步驟；
所提供的試劑足夠分析100-200次。
產品信息：
| 產品貨號 | BML-AK500-0001 |
| 產品名稱 | FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit |
| 規格 | 1*96wells |
| 使用/穩定性 | Store all components, except the microtiter plate, at -80℃ for the highest stability. The HeLa Nuclear Extract, BML-KI140, must be handled with particular care in order to retain maximum enzymatic activity. Defrost it quickly in a RT water bath or by rubbing between fingers, then immediately store on an ice bath. The remaining unused extract should be refrozen quickly, by placing at -80°C. If possible, snap freeze in liquid nitrogen or a dry ice/ethanol bath. To minimize the number of freeze/thaw cycles, aliquot the extract into separate tubes and store at -80℃. The FLUOR DE LYS® Substrate, BML-KI104, when diluted in Assay Buffer, may precipitate after freezing and thawing. It is best, therefore, to dilute only the amount needed to perform the assays of that day. |
| 運輸 | Dry Ice |
| 長期保存 | -80℃ |
| 試劑盒組分 | Nuclear Extract from HeLa Cells (human cervical cancer cell line) (Prod. No. BML-KI140-0100) (100 µl; In 0.1M KCl, 20mM HEPES/NaOH, pH 7.9, 20% (v/v) glycerol, 0.2mM EDTA, 0.5mM DTT, 0.5Mm PMSF, prepared according to a modification of J.D. Dignam et al. (1983) and S.M. Abmayr et al. (1988)). Storage: -80℃, avoid freeze/thaw cycles FLUOR DE LYS® Substrate (Prod. No. BML-KI104-0050) (50 µl; 50mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Developer Concentrate (20×) (Prod. No. BML-KI105-0300) (300 µl; 20×stock solution, dilute in assay buffer before use) Storage: -80℃ Trichostatin A (HDAC Inhibitor) (Prod. No. BML-GR309-9090) (100 µl; 0.2mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Deacetylated Standard (Prod. No. BML-KI142-0030) (30 µl; 10mM in DMSO) Storage: -80℃ HDAC Assay Buffer (Prod. No. BML-KI143-0020) (20 ml; 50mM TRIS/Cl, pH 8.0, 137mM NaCl, 2.7mM KCl, 1mM MgCl2) Storage: -20℃ 1/2 volume microplate (Prod. No. BML-KI101) Storage: Ambient 1/2 volume white microplate (Prod. No. BML-K571) Storage: Ambient |
產品引用文獻：
The activation of histone deacetylases 4 prevented endothelial dysfunction: A crucial mechanism of HuangqiGuizhiWuwu Decoction in improving microcirculation dysfunction in diabetes: M. Chen, et al.; J. Ethnopharmacol. 307, 116240 (2023), Abstract;
Four New Anthraquinones with Histone Deacetylase Inhibitory Activity from Ventilago denticulata Roots: N. Hangsamai, et al.; Molecules 27, 1088 (2022), Abstract;
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